James T. Kirk kommandierte lange Zeit Raumschiffe namens Enterprise. Während TOS meisterte er dabei stets souverän jede Situation und erwies sich als Frauenheld. Kirk benutzte häufig seine Fäuste, um Konflikte zu lösen, ging aber trotz impulsiven Verhaltens stets mit Köpfchen vor und ließ sich nicht zu unüberlegter Gewaltanwendung reizen.

Im Laufe der Kinofilme war er bereits Admiral, wurde aber wegen Verstoßes gegen Vorschriften der Sternenflotte wieder zum Captain degradiert. Mit der Wissenschaftlerin Carol Marcus hatte Kirk einen Sohn, den er aber erst traf, als der schon ein junger Mann war. Bald darauf wurde David, so sein Name, von Klingonen getötet. Dadurch sind Kirk die Klingonen verhasst. Trotzdem beschützte er im sechsten Film die klingonische Kanzlerin und ermöglichte die Fortführung der Friedensgespräche. Im Kampf gegen den fiesen Wissenschaftler Soran starb Kirk im siebten Kinofilm im Beisein von Captain Picard.

Als gebürtiger Russe sollte die Rolle Chekovs das Zusammengewachsensein der Erde bei Star Trek unterstreichen. Seine Herkunft wird durch einen starken Akzent verdeutlicht. Üblicherweise ist er für die Navigation verantwortlich, begleitet den Captain aber auch häufig auf Außenmissionen.

Doktor Leonard H. McCoy (genannt „Pille“) dient 27 Jahre unter Captain Kirk als erster medizinische Offizier auf der USS Enterprise (NCC-1701) und der USS Enterprise (NCC-1701-A).

Er selbst bezeichnet sich sehr bescheiden gerne als einfacher Landarzt, obwohl er seine Laufbahn bei der Sternenflotte als brillanter, junger Mediziner mit magischen Händen beginnt und später bis ins hohe Alter von 137 Jahren den Rang eines Admiralsbekleidet. Zu seinen Fachgebieten zählen: Psychologie, außerirdische Medizin und Exobiologie.

Montgomery Scott, Spitzname Scotty, ist der Chefingenieur und Zweite Offizier auf der USS Enterprise NCC-1701 und der USS Enterprise NCC-1701-A. Im Laufe seiner Sternenflottenkarriere dient er auf insgesamt elf Raumschiffen.

Der Vulkanier Spock ist wohl die Verkörperung von Star Trek überhaupt. Mit seinen spitzen Ohren und seinem Lieblingsausspruch "Faszinierend" ist er weit über die Grenzen der Fans berühmt geworden. Auf der Enterprise in TOS war seine Aufgabe auf der Brücke, in ein Gerät zu schauen, in dem irgendeine Form von blauem Licht zu sehen ist und daraus Informationen abzulesen. Bis heute fragen sich Generationen von Zuschauern, was dort wohl zu sehen gewesen sein mag.

Da Vulkanier keine Gefühle haben, wirkt er stets distanziert und kühl, wobei er häufig unfreiwilligen Humor an den Tag legt. Seine Freunde sind Captain Kirk und Dr. McCoy, mit dem er unentwegt streitet/philosophiert.

Als Steuermann ist Sulu üblicherweise auf der Brücke, wo er diverse Schalter und Hebel zu bedienen hat. Auf Außenmissionen ist er seltener zu sehen. Während man in TOS wenig über ihn erfuhr, zeigen die Filme, dass er mit Chekov befreundet ist. Beide Rollen sollten die Internationalität der Föderation verdeutlichen. Irgendwann muss er eine Frau gehabt haben, da im siebten Film seine Tochter Demora die Enterprise-B steuert, was sowohl Kirk als auch Chekov und Scotty verwundert.

Lt. Uhura ist die Frau, die immer den riesigen Knopf im Ohr trug und dem Captain mitteilte, welche Mitteilungen sie gerade erhalten hat bzw. ob Kommunikation überhaupt möglich ist. Bei Außenmissionen war sie so gut wie nie dabei. Zwischen ihr und Kirk gab es den ersten Kuss einer Farbigen und eines Weißen, der im Fernsehen zu sehen war und damals heftige Kontroversen auslöste. Sie versteht sich vor allem in den Filmen besonders gut mit Scotty.